硒（Se）是人體必須的微量元素之一，它具有抗癌、抗氧化、提高機(jī)體免疫力等功能。硒主要通過食物攝入人體，硒各種形態(tài)決定其不同的功能，其中無機(jī)硒主要為硒酸根[Se(Ⅵ)]和亞硒酸根[Se(Ⅳ)]，無機(jī)硒攝入過量會(huì)引起中毒，有機(jī)硒主要有硒代胱氨酸（SeCys2）、甲基硒代半胱氨酸（MeSeCys）和硒代蛋氨酸（SeMet），是容易被人體吸收的。
近年來，隨著人們健康意識(shí)的增強(qiáng)，富硒農(nóng)產(chǎn)品越來越受歡迎。但是，由于富硒農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)方式各異，農(nóng)產(chǎn)品中硒的賦存形態(tài)有很大的不同。而水稻作為人們?nèi)粘z入的主食，是人們攝入硒形態(tài)的來源之一，因此，對(duì)水稻中硒的形態(tài)分析具有重要的意義。
本實(shí)驗(yàn)采用電感耦合等離子體質(zhì)譜與液相色譜聯(lián)用對(duì)水稻中SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)進(jìn)行分析，采用水浴恒溫振蕩的方法提取水稻中硒形態(tài)，得到方法檢出限、精密度以及實(shí)際樣品的加標(biāo)回收率。
關(guān)鍵詞：LC-ICP-MS；農(nóng)作物；水稻；液相聯(lián)用；五種硒形態(tài)
實(shí)驗(yàn)部分
儀器
表1 液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜儀
表2 LC-ICP-MS儀器工作參數(shù)
化學(xué)品與試劑
一水合檸檬酸（色譜級(jí)）購于阿拉丁，氨水（分析純）購于國(guó)藥，Se(Ⅳ)（濃度為1003±5μg/mL，以硒計(jì)）購于Inorganic Ventures，SeCys2（濃度為44.2±1.0μg/g，以硒計(jì)）、MeSeCys（濃度為34.8±1.0μg/g，以硒計(jì)）、SeMet（濃度為39.4±1.0μg/g，以硒計(jì)）、Se(Ⅵ)（濃度為41.4±1.3μg/g，以硒計(jì)）均購于中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院。
實(shí)驗(yàn)原理
水稻樣品經(jīng)過蛋白酶XIV提取后，用高效液相色譜分離不同的硒形態(tài)，電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測(cè)，外標(biāo)法定量。本次實(shí)驗(yàn)主要對(duì)水稻樣品中SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)的含量進(jìn)行分析。
樣品處理
稱量0.2g樣品于離心管中，加入10mL 30mmol/L Tris-Hcl（pH=7.5）溶液，加入3mg蛋白酶XIV，超聲10min，在37℃下恒溫水浴搖床上振蕩2h。10000r/min離心5分鐘，0.45μm濾膜過濾。上機(jī)測(cè)試，在上述相同情況下制備樣品空白。
測(cè)試結(jié)果
硒形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3所示，硒形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖如圖4所示，水稻樣品色譜圖如圖5所示。SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性均達(dá)到0.999以上。
圖4 硒形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖
圖5 水稻樣品中硒形態(tài)色譜圖
樣品含量
對(duì)三個(gè)平行水稻樣品提取液進(jìn)樣測(cè)試，其實(shí)際水稻樣品中SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)含量結(jié)果如表4所示。
表4 水稻中五種硒形態(tài)含量（μg/kg）
精密度測(cè)試
水稻樣品提取液連續(xù)3次重復(fù)進(jìn)樣，其精密度上機(jī)測(cè)定結(jié)果如表5所示。
表5 水稻樣品提取液精密度測(cè)試結(jié)果（μg/L）
加標(biāo)回收率測(cè)試
為考察該方法的可靠性，向水稻樣中加入一定量的硒形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)溶液，混合均勻后，通過蛋白酶XIV水浴恒溫振蕩提取。從表中可以看出，對(duì)水稻樣品進(jìn)行前加標(biāo)，加標(biāo)回收率在66.8%-109%之間。
檢出限測(cè)試
選取水稻空白樣品提取溶液，連續(xù)7次平行測(cè)定，計(jì)算樣品測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差SD，檢出限為3*SD。水稻樣品中兩種汞形態(tài)的方法檢出限在0.0044mg/kg -0.0153mg/kg之間。
結(jié)論
本文采用LC-ICP-MS測(cè)定水稻樣品中硒形態(tài)的含量。本方法以20mM檸檬酸為流動(dòng)相，使用陰離子色譜柱，在12min內(nèi)將SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)分離，在常規(guī)模式下用電感耦合等離子體質(zhì)譜檢測(cè)。結(jié)果表明， SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)的方法檢出限在0.0044mg/kg -0.0153mg/kg。樣品的前加標(biāo)回收率在66.8%-109%之間，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性系數(shù)R2均大于0.999，表明該前處理方法可靠，能滿足水稻中SeCys2、MeSeCys、Se(Ⅳ)、SeMet和Se(Ⅵ)的快速測(cè)定。
設(shè)備與耗材方案
一、液相聯(lián)用系統(tǒng)配置詳情
