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LC-MS/MS法測定鹽酸雷尼替丁膠囊中N-亞硝基二甲胺

N-亞硝胺二甲胺（NDMA）是一種具有N-N=O 結(jié)構(gòu)的化合物，該化合物能與DNA反應(yīng)使其烷基化，進而致癌。美國FDA曾爆出成品胃藥雷尼替丁中含有超過限量要求的亞硝胺類致癌物N-亞硝胺二甲胺，F(xiàn)DA 發(fā)布公告：召回美國市場上雷尼替丁產(chǎn)品，該公告中提到某些產(chǎn)品中的NDMA 含量會隨著時間推移而有所增加，進而可能導(dǎo)致雜質(zhì)含量高于可接受水平。國內(nèi)外多家藥品生產(chǎn)企業(yè)都曾因消化系統(tǒng)藥雷尼替丁中檢出超限NDMA而啟動召回。因此，監(jiān)管機構(gòu)以及生產(chǎn)商需要一種分析檢測方法，來檢測該類藥物中的N-亞硝胺二甲胺，切實保障人民用藥安全。LC-MS/MS 方法具有高靈敏度、高分辨力、快速分析、結(jié)果準(zhǔn)確等優(yōu)勢，可降低基質(zhì)干擾造成的假陰性或假陽性發(fā)生可能性，可以滿足藥品檢測較嚴(yán)格的靈敏度、專屬性和準(zhǔn)確度要求。本文使用譜育科技EXPEC 5210三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，開發(fā)適用于APCI源的LC-MS/MS方法，用于測試和定量雷尼替丁原料膠囊和片劑中的N-亞硝胺二甲胺。

實驗部分

標(biāo)準(zhǔn)品、試劑和設(shè)備

標(biāo)準(zhǔn)品：N-亞硝胺二甲胺標(biāo)準(zhǔn)品購自中國食品藥品檢定院，于-20℃冰箱保存。

樣品：鹽酸雷尼替丁膠囊，標(biāo)號136#、105#、104#、61#、12#

試劑：甲醇為色譜級，購自默克、甲酸為LC-MS級，購自安譜。

儀器：ULC 510超高效液相色譜儀（具體配有二元超高壓輸液泵、超高壓自動進樣器、柱溫箱）、EXPEC 5210三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀。

液相和質(zhì)譜條件

監(jiān)測模式為多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)，N-亞硝基二甲胺化合物監(jiān)測離子對、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)見下圖。

樣品前處理

參考質(zhì)譜法（中國藥典2015年版四部通則0431）測定，具體前處理步驟如下：

鹽酸雷尼替丁膠囊供試品溶液制備：取膠囊內(nèi)容物適量，相當(dāng)于雷尼替丁300mg，至50mL離心管中，精密加入甲醇10mL，渦旋混勻1min，再振蕩40min，離心，取上清液濾過，取續(xù)濾液即得。

實驗結(jié)果

線性：精密稱取N-亞硝基二甲胺對照品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成1mL中含1、2、5、10、50、100、250、500ng的溶液。按照上述方法依次進樣分析，采用外標(biāo)法擬合后的標(biāo)準(zhǔn)曲線如下圖1所示，不同濃度N-亞硝基二甲胺譜圖疊加圖如圖2所示。

圖1 N-亞硝基二甲胺標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 N-亞硝基二甲胺色譜疊加圖（線性不同濃度）

靈敏度：精密稱取N-亞硝基二甲胺對照品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成1mL中含1ng的溶液，該溶液進樣測試色譜主峰的信噪比不低于10。

穩(wěn)定性：精密稱取N-亞硝基二甲胺對照品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成1mL中含2ng的溶液，重復(fù)進樣6次，峰面積的RSD值為2.34%，符合所得峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不得超過10%的要求。

加標(biāo)回收率：鹽酸雷尼替丁膠囊樣品136#中N-亞硝基二甲胺含量未檢出作為空白樣品，精密稱取300 mg后分別加入不同濃度的標(biāo)品，按照前處理步驟進行前處理平行處理6個，進樣測試后計算回收率。加標(biāo)后溶液中N-亞硝基二甲胺濃度分別為：2 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL。